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  • 资源分类:生物农医
  • 适用专业:预防兽医学
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资料简介
硕士论文-猪伪狂犬病病毒gE基因核酸探针的制备及应用,共64页,41374字
摘 要
伪狂犬病(Pseudorabies,PR)又称Aujeszky氏病,是由伪狂犬病病毒引起的猪、
牛、 羊等多种家畜、家禽及野生动物的一种以发热、奇痒(猪一般除外)、呼吸和神
经系统疾病为特征的重要传染病。在根除伪狂犬病的过程中,疫苗扮演了重要的角色。
在各种疫苗中基因缺失疫苗是应用最广泛的,目前商业化基因缺失疫苗普遍缺失了gE基
因,甚至立法规定只允许gE(gI)基因缺失疫苗使用。本试验根据我国目前广泛使用的伪
狂犬疫苗大多缺失gE基因这一特性,克隆了PRV-S株gE基因的部分序列,分析了序列的
结构、同源性,对PRV-S株gE基因的部分序列进行了PCR扩增,并用地高辛将扩增产物标
记制成核酸探针,用制备的核酸探针进行了临床病料的检测。通过一系列试验,本试验
取得如下的成果:
1.根据 GenBank 收录的 PRV-Min-A 株(登录号为 AY170318)、PRV-LA 株(登录号为
AY173124)、PRV-Ea 株(登录号为 AF171937)、Korea 株(登录号为 AY249861)及 AF207700
株的 gE 基因保守序列设计一对引物,运用 PCR 方法从 PRV-S 株基因组中克隆了 304bp
的 gE 基因 DNA 部分序列。该序列与以上五株不同地域的野毒 gE 基因序列经 DNAStar 软
件比较后发现核苷酸序列的同源性均在 98%以上,说明该片段可用于制备核酸探针来检
测猪伪狂犬病野毒感染。
2.以含有 gE 基因部分序列的重组质粒为模板进行了 PCR 扩增,扩增产物经地高辛
标记后制成 gE 基因核酸探针。特异性检测该探针只与 PRV-S 株 DNA 有阳性反应,而与
PRVBartha-k61 株疫苗毒 DNA、PPV DNA、PCV DNA、PRRSV cDNA、CSFV cDNA 反应均为阴
性,说明该核酸探针具有良好的特异性。敏感性检测说明该探针至少可检测到 4pg 的 DNA
片段,具有较好的敏感性。
3.用制备的 gE 基因核酸探针对临床采集的 32 份猪繁殖障碍病料进行了斑点杂交检
测,结果 4 份病料呈现阳性反应。而同时用针对 gE 基因设计的引物对 32 份病料进行 PCR
检测,也检出 4 份阳性病料,且这四份阳性病料的编号一致,PRV 的野毒感染率为 12.5%,
二种方法的符合率为 100%,说明该核酸探针可以作为一种临床检测猪伪狂犬病野毒感染
的分子生物学方法。
关键词:猪伪狂犬病毒;gE 基因;地高辛标记探针;斑点杂交;野毒株
目录
中文摘要……1
英文摘要……2
英文缩写词表3
前言…………4
文献综述……6
试验一 猪伪狂犬病病毒 gE 基因部分片段的克隆………22
1 试验材料…22
2 试验方法…22
3 结果与分析28
4 讨论………30
试验二 猪伪狂犬病病毒 gE 基因核酸探针的制备………32
1 试验材料32
2 试验方法32
3 结果与分析……………………35
4 讨论 ……36
试验三 临床病料的检测 …………39
1 试验材料 ……… …………… ……… ………39
2 试验方法39
3 结果与分析……………………41
4 讨论 ……42
全文结论……45
参考文献……46
附录…………53
致谢…………57
攻读硕士期间发表的论文…………58
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