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硕士论文-产几丁质酶食线虫真菌绿粘帚霉（Gliocladium virens）对根结线虫生防潜力的研究，共74页，46632字
摘 要
根结线虫（Meloidogyne spp.）是世界性分布的威胁农业生产的主要病原物之一，也
是世界各国的重要植物检疫对象。该病害严重威胁我国保护地蔬菜和果树的生产。由防
治根结线虫的化学药剂而带来环境和农产品安全等问题，正逐渐被认识，而利用天敌真
菌防治植物线虫病害的生防措施有望成为替代措施之一。
本研究对从根结线虫卵或成熟雌 虫上分离到的寄生 线虫机会真菌绿粘帚霉
CFCC80915(Gliocladium virens)进行了生物学和生化特性及其对南方根结线虫的生防潜
力及对番茄南方根结线虫的防治效果的研究。
1、在水琼脂培养基（WA）和玉米粉琼脂培养基（LCMA）上，直接从表面消毒的
卵块或雌虫分离到了 2 株有致病力的寄生菌 MP0237(CFCC80915)和 MP0259。根据其生
长性状和分生孢子梗、分生孢子、厚垣孢子等性状鉴定为 Gliocladium
virens。
2、绿粘帚霉 CFCC80915 培养滤液对南方根结线虫卵孵化都有抑制作用，以 12d 的
培养滤液对南方根结线虫卵孵化抑制率最佳，为 56.8%。
3、绿粘帚霉 CFCC80915 菌丝可以直接穿透侵染线虫的 2 龄幼虫体壁，进而寄生并
杀死 2 龄幼虫。
4、绿粘帚霉 CFCC80915 培养滤液中具有较高的几丁质酶和蛋白酶活性，几丁质内
切酶活 10-14d 达到高峰，为 52.2-53.1ｕ/h ml；几丁质外切酶活 16d 以后开始增加，到
25d 达到高峰；蛋白质酶活在 14-16d 达到高峰。利用活性染色电泳测算其几丁质酶的分
子量分别为 75.8kDa、42.8kDa 和 39.6kDa，说明筛选到的绿粘帚霉 CFCC80915 菌系具
有较高产生几丁质酶的活性，其产生的几丁质酶可以引起根结线虫卵壳的裂解，抑制根
结线虫卵的孵化。
5、利用绿粘帚霉 CFCC80915 孢子悬浮液处理接种南方根结线虫的盆栽番茄试验。
表明，菌剂处理对南方根结线虫的根结的形成有显著的抑制作用。绿粘帚霉 2 个菌系菌
剂剂量为 50g/株番茄苗对番茄南方根结线虫防治处理中，相对防效分别为 86.9%、80%。
关键词：根结线虫;食线虫真菌;绿粘帚霉;生物防治；几丁质酶
目录
摘 要.......I
前 言...... 1
1 根结线虫的习性与危害....... 1
2 根结线虫病害防治的经济重要性........ 2
3 根结线虫病害传统防治存在的问题.... 3
4 根结线虫病害生物防治研究和应用进展............. 4
4.1 食线虫真菌的研究............ 6
4.2 国内外生物制剂的研究. 17
4.3 生防制剂与添加剂的关系.............. 18
4.4 根结线虫生物防治稳定性的关键因素........... 20
5 线虫生防菌绿粘帚霉的研究进展...... 22
5.1 绿粘帚霉的分类地位...... 22
5.2 生物学特征..... 23
5.3 绿粘帚霉 G.virens 的应用 ............... 23
第一章 绿粘帚霉生防菌株的筛选....... 27
1 材料和方法........ 27
1.1 样品来源： ..... 27
1.2 分离培养基..... 27
1.3 分离方法......... 27
1.4 培养 28
1.5 菌种的鉴定..... 28
2 结果与分析........ 28
2.1 分离到寄生真菌的菌落和形态观察............... 28
2.2 分离到寄生真菌的地位. 28
第二章 室内测定绿粘帚霉对南方根结线虫的防治效果..... 31
1 材料与方法........ 31
1.1 根结线虫卵悬浮液的制备............... 31
1.2 根结线虫的 2 龄幼虫挑取............... 31
1.3 卵孵化抑制率测定.......... 31
1.4 CMA 平板观察粘帚霉菌丝根结线虫 J2 的寄生 ............ 31
2 结果.. 31
2.1 绿粘帚霉培养滤液离体条件下对卵孵化的影响............. 31
2.2 南方根结线虫卵壳的形态变化...... 32
2.3 绿粘帚霉菌丝直接作用于根结线虫 2 龄幼虫的观察..... 33
第三章 绿粘帚霉产生几丁质酶和蛋白质酶研究 35
1 材料与方法....... 35
1.1 菌株来源........ 35
1.2 供试试剂的配制............. 35
1.3 产酶培养条件 36
1.4 几丁质降解酶活性测定. 36
1.5 蛋白质酶活性测定......... 38
1.6 蛋白质含量测定............. 38
1.7 几丁质酶活性染色......... 39
1.8 蛋白染色......... 40
2 结果与分析........ 40
2.1 蛋白质含量和几丁质酶活性测定的结果....... 40
2.2 几丁质外切酶活性测定结果.......... 40
2.3 蛋白酶活性测定结果..... 41
2.4 几丁质酶活性染色结果. 41
第四章 绿粘帚霉（G.virens）对根结线虫病害的盆栽防治 ................ 43
1 材料与方法....... 43
1.1 供试菌株........ 43
1.2 生防菌剂配制 43
1.3 南方根结线虫.卵悬液的制备......... 43
1.4 盆栽试验........ 43
2 结果和分析....... 44
第五章 讨论与展望.............. 46
1 关于发酵培养基优化......... 46
2 关于高产几丁质酶和蛋白酶培养条件优化....... 46
3 关于几丁质添加剂对绿粘帚霉 CFCC80915 的控害能力影响.......... 47
4 增强防效的稳定性............. 48
5 安全性评价........ 48
6 根结线虫生物防治展望..... 49
参考文献............... 51
致谢...... 60