学海网

硕士论文-金龟子围食膜结构组成及增效因子对其影响的研究，共62页，35961字
摘要
围食膜是大多数昆虫中肠细胞分泌的一层半透性膜状结构，成圆桶状把肠腔和中肠
壁细胞分开，它具有保护中肠上皮细胞、阻止有害物质侵入和帮助消化等多种功能。因
而将围食膜作为害虫生物防治的新靶标，破坏围食膜这一道物理屏障，即能促进病原物
对昆虫的侵染。因此研究昆虫围食膜的结构与组成以及破坏围食膜的分子机理，将会提
高微生物杀虫剂的杀虫效果，且对促进生物防治在农业生产中的应用具有指导意义。
本研究采用生化技术和分子生物学技术等手段，对华北大黑鳃金龟（Holotrichia
oblita）和暗黑鳃金龟（Holotrichia parallela）围食膜的结构组成及增效蛋白和荧光增白剂
FB28 对其围食膜的作用与影响进行分析。具体结果如下：
1. 华北大黑鳃金龟和暗黑鳃金龟的围食膜均为一层无色透明、厚薄均匀的长管状
薄膜，表面光滑致密，富有弹性，但与多数昆虫围食膜相比韧性较差。
2. 围食膜主要由蛋白质、糖和几丁质组成，采用 Bradford 法测得华北大黑鳃金龟
和暗黑鳃金龟围食膜蛋白质的含量分别为 36.25%和 38.17%，采用苯酚-硫酸法测得华北
大黑鳃金龟和暗黑鳃金龟围食膜糖的含量分别为 8.91%和 9.08%。
3. SDS-PAGE 分析华北大黑鳃金龟围食膜蛋白种类较多，有 28 条多肽比较清晰，
分子量多在 17.6kDa 到 320.3kDa 之间。暗黑鳃金龟围食膜蛋白种类也较多，有 15 条多
肽比较清晰，分子量多在 28.8kDa 到 170.0kDa 之间。
通过粉纹夜蛾肠粘蛋白（TnPM - IIM）特异多抗进行 Western blot，表明鳞翅目昆
虫围食膜中有与 TnPM - IIM 特异多抗起交叉反应的多种蛋白，而金龟子围食膜中未发
现与 TnPM - IIM 特异多抗起交叉反应的蛋白。
4. 棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白处理鞘翅目金龟子和鳞翅目昆虫围食膜，鳞翅目昆
虫围食膜蛋白多肽均有不同程度的降解，金龟子围食膜蛋白多肽未有降解现象，说明棉
铃虫颗粒体病毒增效蛋白对金龟子围食膜没有作用，进一步分析表明鞘翅目金龟子和鳞
翅目昆虫围食膜蛋白组成等方面存在差异。
5. 荧光增白剂 FB28 离体处理华北大黑鳃金龟和暗黑鳃金龟围食膜，多数蛋白多肽
被解离，且随处理时间的增长，蛋白被解离的量增大。结果表明，围食膜蛋白主要是几
丁质结合蛋白，荧光增白剂 FB28 可使几丁质结合蛋白从围食膜上解离下来。
6. 荧光增白剂 FB28 喂食华北大黑鳃金龟和暗黑鳃金龟，实验表明荧光增白剂
FB28 对围食膜的破坏作用是短暂的、可逆的。喂以荧光增白剂后，围食膜破坏，幼虫
若取食新鲜食物可促使荧光增白剂从中肠中排出，造成了荧光增白剂作用的可逆性。
关键词：围食膜；华北大黑鳃金龟；暗黑鳃金龟；结构组成；增效蛋白；荧光增白
剂
目 录
中文摘要....1
英文摘要....3
前言....1
1. 昆虫中肠防御体系 - 中肠围食膜 ...........1
2. 生物防治增效因子.................10
3. 研究的目的意义...15
材料与方法................17
1. 试验材料...............17
2. 方法步骤...............20
2.1PM 的制备 .......20
2.2PM 的形态结构观察 .........20
2.3PM 组分含量测定 .............20
2.4PM 的蛋白组成分析 .........23
2.5增效蛋白对 PM 的作用 ....25
2.6 荧光增白剂 FB28 对 PM 的作用与影响 .............25
结果与分析................26
1. PM 的生理位置 ....26
2. PM 的结构组成 ....26
2.1PM 的形态与结构 .............26
2.2PM 组分含量 ...27
2.3PM 的蛋白组成 .................28
3. 增效蛋白对 PM 的影响 ........30
4. 荧光增白剂 FB28 对 PM 的作用与影响 .................33
4.1 荧光增白剂 FB28 对 PM 蛋白组分的影响 .........33
4.2 荧光增白剂 FB28 对 PM 结构的影响 .................33
讨论..35
结论..40
参考文献..41
附录..48
致谢..49
硕士期间发表的学术论文..........50
导师组意见................51
学位论文独创性声明及学位论文版权使用授权书......52