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资料简介
硕士论文-仔猪腹泻多病原卵黄抗体制备及稳定性研究,共66页,41677字
摘 要
卵黄抗体是近年来的一个研究热点,用于多种疾病的预防和治疗,是一种有良好发
展前途的生物制剂。本试验成功制备了针对仔猪腹泻的多病原卵黄抗体,并对卵黄抗体
效价变化规律、分离提取方法、喷雾干燥条件及卵黄粉的稳定性进行了初步研究,试验
结果如下所述。
1 卵黄抗体效价变化规律的研究
以引起仔猪腹泻的常见病原大肠杆菌(K88、K99、987P)和传染性胃肠炎病毒、
流行性腹泻病毒为抗原,免疫蛋鸡,定期检测卵黄抗体滴度,得出卵黄抗体滴度变化规
律:首次免疫抗原后 7d 可检测到抗体存在,但抗体滴度较低,随后抗体滴度缓慢升高,
第 2 次免疫和第 3 次免疫后,抗体滴度有个小幅的下降,随后迅速升高,第 3 次免疫后
12d,抗体滴度达到峰值,维持 30d 后抗体滴度逐渐下降。
2 卵黄抗体分离提取方法比较
从对卵黄的去脂效果、提取液的蛋白含量、提取的抗体纯度和对抗体活性的影响等
方面,综合比较了酸化水法、聚乙二醇法、氯仿法和水-辛酸法 4 种分离提取卵黄抗体
的方法,结果显示水-辛酸法效果最好,此种方法提取的抗体脂肪残留量较低、抗体产
率高达 6.8mg/mL、纯度 93.6%,明显优于其它 3 种提取方法。
3 卵黄粉的制作及稳定性研究
研究了在卵黄中添加不同保护剂及其不同添加比例,喷雾干燥进出口温度对卵黄抗
体的影响,结果显示:在卵黄中添加乙醇溶解邻苯二甲酸丙甲基纤维素和淀粉,进口温
度 145℃,出口温度 70℃的条件制备的卵黄粉品质最好。
为研究卵黄粉的稳定性,本试验采用温度梯度、pH 梯度及保存条件作为影响卵黄
粉中抗体的外部因素,对卵黄抗体稳定性进行了初步研究,结果显示:卵黄粉中抗体对
温度稳定性良好,在 70℃以下卵黄抗体性质稳定,90℃时抗体活性迅速下降;pH 低于
4.0,抗体开始失活,pH 1.5 时活性残余 30%;卵黄粉在 4℃存放 6 个月,抗体活性保持
不变,25℃存放 6 个月,活性开始丢失。说明卵黄粉具有耐酸、耐碱,易于保存等优点。
关键词:鸡;仔猪;腹泻;卵黄抗体;分离提取;稳定性
目 录
摘 要 .............. I
ABSTRACT II
符号说明 ..... IV
前 言 ..............1
文献综述 ........3
1 卵黄抗体的研究概况 ...3
1.1 卵黄抗体的形成 ........3
1.2 卵黄抗体结构及生物学特性 ......4
1.3 卵黄抗体稳定性 ........5
1.4 卵黄抗体作用机理 ....5
1.5 卵黄抗体的提取方法 6
1.6 卵黄抗体应用 ............8
1.7 使用卵黄抗体存在的问题 ..........9
1.8 卵黄抗体的发展前景 9
2 仔猪腹泻的研究 .........10
2.1 病毒性腹泻 ..............10
2.2 大肠杆菌性腹泻 ......11
2.3 仔猪腹泻的防治现状 ................11
研究目的及意义 ............13
试验一 卵黄抗体滴度的消长规律 ................14
1 材料 ...........14
2 方法 ...........16
2.1 抗原的制备 ..............16
2.2 检测用抗原的制备 ..19
2.3 试验动物及处理 .....20
2.4 卵黄抗体的提取纯化 ................21
2.5 卵黄抗体效价的检测 ................22
3 结果与分析 .................24
3.1 猪流行性腹泻病毒的培养 ........24
3.2 病毒毒价检测 ..........24
3.3 检测用抗原最适浓度结果确定 25
3.4 卵黄抗体的变化规律 ................26
4 讨论 ...........30
试验二 卵黄抗体分离提取方法的研究 ........32
1 材料 ...........32
2 方法 ...........32
2.1 卵黄的制备 ..............32
2.2 卵黄抗体不同分离方法 ............32
2.3 卵黄抗体的纯化 ......33
2.4 不同方法提取卵黄抗体的效果比较 ..........33
3 结果与分析 .................35
4 讨论 ...........37
4.1 酸化水法 .................37
4.2 聚乙二醇法 .............38
4.3 氯仿法 ...38
4.4 水-辛酸法................38
试验三 卵黄粉的制作及温度、PH 值和储存条件对抗体活性的影响............39
1 材料 ...........39
2 方法 ...........39
2.1 卵黄粉的制作工艺 ..39
2.2 温度对卵黄粉中抗体活性的影响 ..............40
2.3 pH 值对卵黄粉中抗体活性的影响............41
2.4 储存条件对卵黄粉中抗体活性的影响 ......41
3 结果与分析 .................41
3.1 卵黄粉制作工艺的研究 ............41
3.2 温度对卵黄粉中抗体活性的影响 ..............43
3.3 pH 值对卵黄粉中抗体活性的影响............44
3.4 储存条件对卵黄粉中抗体活性的影响 ......44
4 讨论 ...........45
4.1 卵黄粉的制备工艺 ..45
4.2 温度对卵黄粉中抗体活性的影响 ..............45
4.3 pH 值对卵黄粉中抗体活性的影响............46
4.4 储存条件对卵黄粉中抗体活性的影响 ......46
结 论 ............47
参考文献 ......48
致 谢 ............51
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