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  • 资源类别:论文
  • 资源分类:生物农医
  • 适用专业:预防兽医学
  • 适用年级:大学
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资料简介
硕士论文-毛皮动物病原菌耐药基因TEM-1和GyrA的核酸探针检测,61页,39402字
摘 要
随着毛皮动物养殖业的不断发展,毛皮动物细菌病的危害日趋突出,几乎每个养殖
场都发生过细菌病,给毛皮动物养殖业带来巨大的经济损失。目前,流行的细菌病主要
是大肠杆菌病、巴氏杆菌病、绿脓杆菌病和肠杆菌病等。兽医临床大量应用抗菌药物来
防治细菌病,且多不合理用药,导致毛皮动物致病菌耐药株不断增多,耐药谱不断扩大,
药物防治效果越来越差,给临床筛选抗菌药物和针对性治疗带来了困难,严重影响了毛
皮动物养殖业的进一步发展。
本研究通过调查山东省和安徽省部分地区毛皮动物细菌病流行现状,从患病动物组
织分离鉴定病原菌,结合细菌药敏试验,了解其耐药性。同时,扩增耐药基因 TEM-1
和 gyrA,并制备地高辛标记的核酸探针,用该探针对毛皮动物病原菌分离株进行斑点杂
交检测,明确耐 β-内酰胺类病原菌和耐氟喹诺酮类大肠杆菌在毛皮动物中的携带情况。
本研究从患病毛皮动物共分离到致病菌 51 株,通过生化反应鉴定,大肠杆菌 14
株(27.5%),金黄色葡萄球菌 8 株(15.7%),肠杆菌 7 株(13.7%),变形杆菌 6 株
(11.8%),巴氏杆菌 4 株(7.8%),枸橼酸杆菌 3 株(5.9%),绿脓杆菌 3 株(5.9%),
嗜血杆菌 2 株(3.9%),耶尔森氏菌 2 株(3.9%),志贺杆菌 1 株(2.0%),肺炎双球
菌 1 株(2.0%)。
42 株革兰氏阴性菌通过 K-B 法筛选出 34 株耐 β-内酰胺类细菌,占细菌分离株的
80.95%。大肠杆菌耐喹诺酮类细菌 8 株,占大肠杆菌分离株的 57.14%。药敏试验的结
果显示,半数以上细菌对磷霉素钠、先锋 V、头孢噻肟钠、庆大霉素、硫酸链霉素敏感,
对氨苄西林、青霉素、四环素、林可霉素表现出耐药性。
分别针对耐药基因 TEM-1 和 gyrA 设计引物,进行 PCR 扩增,产物大小分别为 301bp
和 169bp。对耐药基因片段进行地高辛标记,制备核酸探针,对此探针进行标记效率、
特异性、敏感性的检测。用地高辛标记的 TEM-1 基因片段作为核酸探针,对 42 株革兰
氏阴性致病菌进行斑点杂交,检出 38 株耐 β-内酰胺类菌株,阳性率为 90.48%。用地高
辛标记的 gyrA 基因片段作为核酸探针,对 14 株大肠杆菌临床分离株进行斑点杂交,检
出 7 株耐氟喹诺酮类大肠杆菌,阳性率为 50%。
本研究证实,毛皮动物细菌病耐药严重且多重耐药,应该引起兽医工作者的足够重
视。本研究建立了毛皮动物病原菌对 β-内酰胺类药物及氟喹诺酮类药物耐药性的核酸探
针检测方法,可以同时对大量样本进行检测,为临床合理使用抗菌药,有效防治毛皮动
物细菌病奠定了技术基础。
关键词:毛皮动物细菌病;TEM-1 基因;gyrA 基因;耐药性;核酸探针;斑点杂交
目录
摘要Ⅰ
英文摘要………………Ⅲ
缩略语表………………Ⅴ
第一章 文献综述………1
第二章 试验研究……15
前言15
试验一 毛皮动物病原菌的分离、鉴定及耐药性分析 …...… … …… 16
1 材料与方法…………16
2 结果与分析…………18
3 讨论…………………22
试验二
斑点杂交检测毛皮动物病原菌的 TEM-1 基因….…24
1 材料与方法…………24
2 结果与分析…………32
3 讨论…………………35
试验三 斑点杂交检测大肠杆菌的 GyrA 基因 …........… ………………37
1 材料与方法…………37
2 结果与分析…………39
3 讨论…………………42
结论43
创新点…………………44
参考文献………………45
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