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硕士论文-玉米核糖体失活蛋白基因z108在大肠杆菌和烟草中表达及其对病毒和病原真菌的抗性鉴定，共54页，27905字
摘 要
玉米核糖体失活蛋白（Maize Ribosome-Inactivating Protein）是在玉米胚乳中特异表
达的一种具有 RNA N-糖苷酶活性的核糖体失活蛋白。它首先以无活性的单链前体蛋白
形式合成，经水解酶酶解形成由非共价键连接的双链活性毒蛋白。
为了探索玉米核糖体失活蛋白 z108 基因的特性、功能和抗病机制，研究工作从以
下几个方面开展：1）建立普通烟草的瞬间表达转化体系，将含有 z108 基因的农杆菌菌
株 pCam1301/91-108 转化烟草叶肉原生质体，并对其转化细胞进行分子生物学和细胞学
验证；2) 对转化体进行 ToMV 病毒的接种试验，检测转化体对病毒的抗性作用；3) 分
离纯化大肠杆菌 pET/91M-108 中表达的目的蛋白，并测定 z108 纯化蛋白的抑菌作用。
主要研究结果如下：
1．烟草原生质体细胞的z108基因转化率为6.82-17.84%。
其中：1）裂解液成分为：1.0%纤维素酶、0.5%离析酶、0.5M甘露醇、5000.0mg/L
CaCl2，25℃保温12-14小时；2）叶肉原生质体细胞与根癌农杆菌菌株pCam1301/ 91-108
共培养30min，25mg/L潮霉素筛选获得转化体；3）转化体细胞经PCR和RT-PCR检测证
明z108基因已整合到烟草原生质体细胞的核基因组中。
2．z108基因T0代转化体单株中88%为目标基因和报告基因共表达的转化体。
对已有的 z108 基因烟草转化体进行目的基因及报告基因 Gus 的 PCR 检测、
RT-PCR、扩增产物酶切鉴定以及基因测序分析，证明 z108 基因已在烟草植株中转录和
表达。
3．z108 基因烟草转化体对 ToMV 病毒有抑制作用。
病毒接种试验结果表明，烟草转化体W9和W802单株均对ToMV病毒的增殖有明显
的抑制作用，花叶症状表现较晚，且发病症状不明显。
4．z108纯化蛋白对病原真菌具有抑制作用。
浓度为0.02329-0.04658μg/μl的z108纯化蛋白可完全抑制黄曲霉、黑曲霉、番茄枯
萎病菌、棉花枯萎病菌分生孢子的萌发。对病原真菌的抑制作用主要表现为：1）抑制
孢子萌发；2）抑制芽管伸长；3）抑制菌体细胞的生长。
关键词：玉米核糖体失活蛋白基因 z108；转化；抗病性；抑菌作用

目录
摘 要................i
Abstract..........ii
前 言............... 1
文献综述......... 2
1 核糖体失活蛋白的分类与分布... 2
2 核糖体失活蛋白的结构............... 3
3 核糖体失活蛋白的作用机制....... 4
4 核糖体失活蛋白的应用............... 7
5 玉米核糖体失活蛋白 10
材料与方法... 14
1 试验材料... 14
2 试验方法... 14
结果与分析... 20
1 玉米核糖体失活蛋白基因 z108 的原核表达 ............. 20
2 z108 基因在烟草原生质体中的转化及表达 ............... 21
3 z108 基因烟草转化体的分子生物学鉴定 .. 23
4 z108 基因烟草转化体的抗病性检测 .......... 27
5 玉米核糖体失活蛋白 z108 对病原真菌的抗性鉴定 . 28
讨 论............. 30
1 z108 基因在烟草原生质体中的转化 .......... 30
2 z108 转基因烟草具有病毒特异抗性 .......... 30
3 z108 纯化蛋白对病原真菌的作用 .............. 31
结 论............. 32
参考文献....... 33
附 图............. 39